超微量核酸分析儀通常基于紫外-可見分光光度法的原理。核酸分子在特定波長(zhǎng)下(如260nm對(duì)于DNA和280nm對(duì)于RNA)具有特征性的吸光度。儀器通過(guò)一束特定波長(zhǎng)的光照射樣品,然后測(cè)量透過(guò)光的強(qiáng)度。根據(jù)朗伯-比爾定律,吸光度與樣品中核酸的濃度成正比。
為了實(shí)現(xiàn)超微量的檢測(cè),儀器采用了先進(jìn)的光學(xué)系統(tǒng)和高靈敏度的探測(cè)器。常見的光學(xué)系統(tǒng)包括氙燈或氘燈作為光源,以及高精度的單色器來(lái)選擇特定波長(zhǎng)的光。探測(cè)器通常為光電二極管陣列或電荷耦合器件(CCD),能夠快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)微弱的光信號(hào)。一些還結(jié)合了熒光檢測(cè)技術(shù)。通過(guò)使用特定的熒光染料與核酸結(jié)合,在激發(fā)光的作用下產(chǎn)生熒光信號(hào),從而提高檢測(cè)的靈敏度和特異性。
1.超高靈敏度
能夠檢測(cè)極微量的核酸樣品,通常只需0.5-2μL的樣品體積,這對(duì)于珍貴或難以獲取的樣品尤為重要。
2.寬濃度范圍檢測(cè)
可以同時(shí)準(zhǔn)確測(cè)量從納克級(jí)到微克級(jí)的核酸濃度,適應(yīng)不同濃度樣品的檢測(cè)需求。
3.快速檢測(cè)
在短短幾秒鐘內(nèi)即可完成樣品的檢測(cè)和分析,大大提高了實(shí)驗(yàn)效率。
4.無(wú)需稀釋
直接對(duì)原始樣品進(jìn)行檢測(cè),避免了因稀釋可能帶來(lái)的誤差和樣品損失。
5.多參數(shù)分析
除了測(cè)量核酸濃度,還能同時(shí)提供如A260/A280比值、A260/A230比值等參數(shù),用于評(píng)估核酸的純度。
6.操作簡(jiǎn)便
儀器通常配備了直觀的用戶界面和自動(dòng)化的操作流程,使操作人員能夠輕松上手。
應(yīng)用領(lǐng)域:
1.分子生物學(xué)研究
在基因克隆、PCR擴(kuò)增、DNA測(cè)序等實(shí)驗(yàn)中,準(zhǔn)確測(cè)定核酸樣品的濃度和純度是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。能夠?yàn)檠芯咳藛T提供快速、準(zhǔn)確的核酸定量數(shù)據(jù)。
2.疾病診斷
例如在腫瘤診斷中,通過(guò)檢測(cè)患者血液或組織中的特定核酸標(biāo)志物,如微小RNA(miRNA),為疾病的早期診斷和預(yù)后評(píng)估提供依據(jù)。
3.藥物研發(fā)
在新藥開發(fā)過(guò)程中,對(duì)核酸藥物的質(zhì)量控制和活性評(píng)估離不開對(duì)核酸的精確分析。
4.農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)
用于檢測(cè)動(dòng)植物的基因變異、遺傳育種以及病原體的核酸檢測(cè)。
5.環(huán)境監(jiān)測(cè)
檢測(cè)環(huán)境中的微生物和污染物的核酸,評(píng)估環(huán)境質(zhì)量和生態(tài)系統(tǒng)的健康狀況。
使用超微量核酸分析儀的注意事項(xiàng):
1.樣品制備
確保樣品的純度和均一性,避免雜質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾。
2.儀器校準(zhǔn)
定期對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn),以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
3.操作規(guī)范
嚴(yán)格按照儀器的操作手冊(cè)進(jìn)行操作,避免因操作不當(dāng)導(dǎo)致的誤差和儀器損壞。
4.維護(hù)保養(yǎng)
定期對(duì)儀器進(jìn)行清潔、維護(hù)和檢查,確保儀器的正常運(yùn)行和使用壽命。